1、新柱柱效測試，為何塔板數(shù)明顯偏低？
·確保系統(tǒng)狀態(tài)正常，如有必要再?zèng)_洗一次。
·柱效受系統(tǒng)死體積擴(kuò)散影響。沃特世(Waters®)色譜柱出廠測試是在體積zui小化的系統(tǒng)上進(jìn)行，塔板數(shù)較高。通常自測如能達(dá)到70%以上，就可以接受。
·色譜柱體積越小，系統(tǒng)死體積(管路、檢測器流通池)對柱效的影響就越大。對于小內(nèi)徑色譜柱(2.1和3 mmid)、和/或短的色譜柱(≤10cm)，盡可能減少系統(tǒng)死體積(管路長度/內(nèi)徑、流通池)，并仔細(xì)檢查管路與色譜柱的連接。檢測器采樣頻率應(yīng)設(shè)置為20 Hz。
·用什么條件和什么樣品測試的？峰保留時(shí)間越短，越容易受系統(tǒng)死體積影響。建議調(diào)整流動(dòng)相條件，使峰保留時(shí)間在10分鐘(常規(guī)HPLC系統(tǒng))或5分鐘(UHPLC系統(tǒng))。
·樣品進(jìn)樣體積越大，樣品溶劑會(huì)導(dǎo)致峰擴(kuò)散。HPLC柱可進(jìn)樣1 μL，UPLC柱可進(jìn)樣0.1 μL。
2、新柱上機(jī)，基線一直不能平衡，怎么辦？
·首先斷開檢測器，按照對色譜柱的高洗脫強(qiáng)度溶劑5倍柱體積或者重復(fù)5次梯度沖洗色譜柱，然后按照測試柱效的方法測試。
·無規(guī)律的噪音，可考慮是否有氣泡進(jìn)入檢測池，沃特世儀器用戶請撥打免費(fèi)售后，獲得沖洗檢測池指導(dǎo)。
·規(guī)律性的上下波動(dòng)基線，可考慮是否泵混合效率不足，在泵后增加mixing loop，具體請咨詢儀器維修工程師。
·實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的環(huán)境條件是否會(huì)干擾到儀器，以及色譜柱柱溫情況。
·如果基線緩慢上飄或下飄，檢查流動(dòng)相是否存在配制不均勻、或者在緩慢揮發(fā)的情況。
·更換同類型的舊柱情況會(huì)如何？有時(shí)需要對新色譜柱進(jìn)行一定的老化(可以運(yùn)行幾次梯度方法)。
3、新柱一進(jìn)樣峰就拖尾，是色譜柱已經(jīng)壞了嗎？
·檢查系統(tǒng)狀態(tài)正常，檢查管路與色譜柱連接無死體積。
·對新色譜柱進(jìn)行柱效測試，檢查是柱效問題還是應(yīng)用問題(可向我們索取柱效測試標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)品配方)。
- 若柱效測試峰塔板數(shù)明顯偏低，請參考問題1。
- 若柱效測試結(jié)果正常，判斷為應(yīng)用問題。
請考慮：這根色譜柱是否適合這個(gè)應(yīng)用項(xiàng)目？過去那根舊色譜柱在進(jìn)行這個(gè)項(xiàng)目測試時(shí)，色譜柱是否已經(jīng)被離子對條件或其他改性條件用過？
4、新柱不能重現(xiàn)舊色譜柱譜圖，是色譜柱的批次問題嗎？
·新色譜柱是否需要老化或充分的活化平衡？舊色譜柱是否在測試項(xiàng)目以前經(jīng)歷過變性條件(如離子對試劑)？項(xiàng)目之前用過不同批次色譜柱測試并能重現(xiàn)嗎？
·如手頭有可用的舊柱，請對同一個(gè)樣品、同一系統(tǒng)、同一配制流動(dòng)相進(jìn)行平行比對(同1天或隔天)，建議每根色譜柱上。重復(fù)3次平行進(jìn)樣。如果兩根色譜柱上的各自3針進(jìn)樣譜圖均穩(wěn)定重現(xiàn)(可完全重疊，沒有增減)，而兩根色譜柱的譜圖有所差異(個(gè)別峰的增加/丟失/分離改變)，可確認(rèn)兩柱有差異。可能該項(xiàng)目條件敏感，導(dǎo)致對色譜柱批次敏感(“挑批次”)。
·如有可能，優(yōu)化分析方法，并用至少兩根以上不同填料批次的色譜柱進(jìn)行方法重現(xiàn)性檢查。
5、新柱連續(xù)進(jìn)樣，保留時(shí)間不穩(wěn)定，一直有漂移，怎么回事？
·色譜柱的平衡有沒有充分，尤其是使用離子對試劑的情況下。
·流動(dòng)相配制是否足夠均勻，比如磷酸鹽與乙腈需要?jiǎng)×艺饟u混合，超聲混合不充分。
·流動(dòng)相是否存在揮發(fā)性組分，導(dǎo)致緩慢變化。
·是否使用柱溫箱，或者色譜柱是否暴露在溫度變化較大的環(huán)境中(如空調(diào)風(fēng)口等)。
·親水作用色譜柱(如XBridge Amide柱，XBridge/Atlantis/CORTECS HILIC柱)，需要活化步驟，以及較長時(shí)間的再平衡，請?jiān)兾覀儭?/span>
·進(jìn)行柱效測試，連續(xù)進(jìn)針，看保留時(shí)間是否漂移，確認(rèn)儀器狀態(tài)是不是穩(wěn)定的
